质量控制是外泌体研究中非常重要的一环,可以保证实验结果的准确性和可靠性。外泌体的纯度、微生物含量、内毒素含量都可能对下游进行组学、细胞、动物实验的数据产生影响,因此需要根据下游的具体用途来对外泌体进行相应的检测才能确保分离质量。
1. 纯度检测
目前外泌体纯度的表征尚无统一的方法,调研文献发现方法主要有颗粒数/蛋白量、蛋白阴性指标检测、RNA片段分布分析、HPLC检测等方法来实现,经过实验测试数据发现,有两个方法在表征纯度方法数据的可信度较高:1.基于膜结构的生物特性,通过对比Triton X-100裂解外泌体颗粒前后的粒径数量变化,确定样本中含有脂膜结构的外泌体颗粒占比;2.通过膜染料标记方法,实现脂膜成分标记,通过纳米流式检测能够被染料标记发光的颗粒占比(该方法目前仅适用于动物细胞来源的外泌体);
2. 污染物分析
外泌体在制备过程中可能由于样本自身或者环境引入,导致可能存在细菌污染、支原体污染、内毒素含量偏高等问题,这些污染将导致下游实验存在数据偏差甚至是无法正常开展,因此对于外泌体的质量控制除了在制备环节尽可能保证无菌环境,还需要对制备好的外泌体进行相应的检测,符合要求后才能进行下游的检测或应用。
检测项目
服务序号 | 服务内容 | 服务说明 | 服务周期 |
1 | 纯度检测(裂解法) | 检测triton-100裂解前后的外泌体颗粒浓度变化并分析外泌体的纯度值,交付:PDF格式样品粒径和浓度报告,XLSX格式样品粒径分布,PDF格式标准品浓度报告 | 3个工作日 |
2 | 纯度检测(染料法) | 使用Evmembrane Green Stains染料对颗粒进行膜标记并分析外泌体的纯度值(仅适用于动物源性外泌体),交付:PDF格式样品粒径和浓度报告,XLSX格式样品粒径分布,PDF格式标准品浓度报告 | 3个工作日 |
3 | 质量控制(微生物检测) | 使用摇菌24小时的方式检测外泌体是否存在染菌情况,交付:PDF格式样品检测结果报告,JPG格式拍照结果 | 3个工作日 |
4 | 质量控制(支原体检测) | 使用qPCR方法检测外泌体是否存在支原体感染,交付:PDF格式样品检测结果报告,XLSX格式分析结果,PCRD荧光定量仪器原始数据 | 3个工作日 |
5 | 质量控制(内毒素检测) | 使用内毒素检测试剂盒检测外泌体的内毒素含量,交付:PDF格式样品检测结果报告,JPG格式拍照结果 | 3个工作日 |
微环DNA表达双靶向抗体的癌症免疫治疗技术成为继CAR-T技术(“嵌合抗原受体T细胞免疫疗法”)、TIL技术(“肿瘤渗润淋巴细胞技术)、免疫检查点抑制剂等技术之后又一项获得成功的新一代治疗技术。