对外泌体的内容物分析常通过高通量测序或蛋白定量质谱等方法,测序是寻找差异表达基因的重要手段,寻找到差异基因,下一步就是对这些差异基因做验证和研究了,首先需要对差异基因做定性定量的验证,目的是确定该基因在特定组织(细胞)来源的外泌体中的表达量与对照有差异;然后再对差异表达基因的功能进行验证,如将基因进行敲除(敲低)、过表达或进行功能回复实验,确定该基因的差异表达与生理或病理状态相关。
1. 实时荧光定量PCR(qPCR)
实时定量PCR技术于1996年由美国ABI公司推出,由于该技术不仅实现了从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、更能有效的解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,以成为国际公认的核酸分子定量的标准方法。目前最常用的实时定量方法是染料(SYBR Green I)法和TaqMan探针法两种。该技术已经广泛应用于分子生物研究的各个方面,如:DNA定量、RNA定量、SNP分析、基因型分析、RNA变异分析等。
2. 数字PCR(ddPCR)
数字PCR可以将核酸样品分配到大量独立、平行的微反应单元(纳升级)中,部分反应单元包含靶标分子(阳性),而其他不包含(阴性),接着进行扩增,并利用TaqMan化学试剂或染料标记探针检测靶标序列,能够实现靶标分子的绝对计数,具有特异性强、灵敏度高、绝对定量、准确性好、抗干扰能力强等优点。
3. 荧光素酶报告基因(Luc)
荧光素酶报告基因(Luc)是指以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。
检测项目
服务序号 | 服务内容 | 服务说明 | 服务周期 |
1 | 基因验证(qPCR) | 对RNA进行逆转录后进行实时荧光定量PCR检测,交付:DOCX格式报告,PCRD格式机器原始数据 | 7个工作日 |
2 | 基因验证(ddPCR) | 对RNA进行逆转录后进行数字PCR检测,交付:DOCX格式报告,PCRD格式机器原始数据 | 10个工作日 |
3 | 荧光素酶报告基因(Luc) | 检测miRAN对靶标mRNA的3‘UTR或者海绵基因lncRNA\circRNA的靶向调控关系或检测转录调控因子对靶基因的调控关系,交付:DOCX格式报告,PZFX格式机器原始数据 | 20个工作日 |
微环DNA表达双靶向抗体的癌症免疫治疗技术成为继CAR-T技术(“嵌合抗原受体T细胞免疫疗法”)、TIL技术(“肿瘤渗润淋巴细胞技术)、免疫检查点抑制剂等技术之后又一项获得成功的新一代治疗技术。